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hinDiii

HindIII切割位点是:A|AGCTT EcoRI切割为点是:G|AATTC http://www.neb.com/nebecomm/products/productR0104.asp http://www.neb.com/nebecomm/products/productr0101.asp

你的这个电泳图基本上都可以看到主条带,从上往下第一条很清晰的条带就是基因组DNA,这条条带除了二号基本是比较完整而明亮的,做下游操作基本没啥问题。二号不是没有,而是量低了。四号和五号可以看到点样孔里面有些明亮的东西,这些是蛋白污染...

这样且可能不能全部切开,如果只是鉴定的话可以,但要是用于连接就会有大量的假阳性。你可以考虑先用一种酶切,回收后换另一种酶切,都是用最适Buffer,效果应该会好一些

Enzyme Cat # Temp Supplied NEBuffer SAM % Activity in NEBuffer 1.1 2.1 3.1 CutSmart EcoRI R0101 37°C NEBuffer EcoRI no 25 100* 50 50* HindIII R0104 37°C NEBuffer 2.1 no 25 100 50 50 Double Digest Recommendations for EcoRI + Hin...

这么专业的问题,幸好遇见我了:) λ-HindIII digestion 由于其自身的末端带有COS粘性序列,可以自身结合在一起,这会影响23K和4K片段的亮度。如果4K条带明显暗就说明自身粘连比较严重。因此在电泳前应该60度预热5分钟。

高度怀疑PVAX1的序列有问题。 1。直接测序。 2。如果不方便测序,设计一个PCR ,其中一个引物的3’端正跨HindIII的酶切点。 3. 如果以上方法你都不能做,那就换个酶吧。把你想要插入的片段加上相应的位点就可以了。

BamH1 ggattc 同工酶 Bst1 ggattc Hind3 好像没有同工酶吧

看吧

看你买的哪个公司的酶了,酶的说明书上有的

如图

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